要想深挖外泌體的潛能，使其發(fā)揮更大的作用，必先獲得高純度、內(nèi)含物少丟失的外泌體樣本。小編為大家介紹一種快速并分離外泌體的方法——蜀科實(shí)驗(yàn)室離心機(jī)分離法。
 

超速離心法是常用的外泌體純化手段，在以蜀科低速離心機(jī)離心除去掉死亡細(xì)胞和細(xì)胞碎片后，就通過(guò)蜀科高速離心機(jī)將大小相同的囊泡顆粒從可溶性分子如游離蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì)復(fù)合物中沉淀并純化出來(lái)。重要的是，隨后要用PBS或新鮮生長(zhǎng)培養(yǎng)基少一次的清洗外泌體，從而來(lái)減少其中游離的殘存蛋白。此外，所有離心步驟必須在4°C下進(jìn)行，借此來(lái)保持蛋白酶、DNase和RNases處于非活性狀態(tài)，也就是必須使用蜀科的冷凍實(shí)驗(yàn)室離心機(jī)。

通常超速離心也會(huì)與蔗糖密度梯度（其密度從低到高的連續(xù)分布）或蔗糖墊（30% sucrose cushion）組合使用，即在離心機(jī)中以100,000-200,000 x g離心沉淀（含有外泌體）120分鐘，可使樣品中的外泌體應(yīng)將以1.13-1.19g/mL的蔗糖密度范圍內(nèi)進(jìn)行富集。

盡管這種強(qiáng)強(qiáng)聯(lián)手的方法可以獲得高度純化的外泌體，但也存在一些缺點(diǎn)。確實(shí)，超速離心的過(guò)程耗時(shí)耗力，且需要耗費(fèi)大量的原料。而大的缺陷在于重復(fù)離心操作很有可能對(duì)外泌體的囊泡造成損害從而降低其質(zhì)量，又或者樣品中的可溶性蛋白可能與外泌體一起形成聚集體和團(tuán)塊進(jìn)而產(chǎn)生污染。

蜀科實(shí)驗(yàn)室離心機(jī)可以幫助大家獲得外泌體，而外泌體到手后要如何發(fā)光發(fā)熱，有興趣的朋友可以關(guān)注我們的公眾號(hào)：“shukeyiqi”來(lái)蜀科小編，我們可以為您提供數(shù)據(jù)庫(kù)，助您一臂之力。