人類的動(dòng)脈硬化、炎癥、糖尿病、癌癥等多種疾病和衰老等被證實(shí)與活性氧和自由基有關(guān).接下去以葡萄為原料，研究天然發(fā)酵過(guò)程中還原力、DPPH自由基、羥基自由基、超氧自由基和ABTS自由基清除能力的變化，其中蜀科立式高速離心機(jī)又發(fā)揮了強(qiáng)大的作用。

  行葡萄酵素的制備。用無(wú)菌水在無(wú)菌條件下 輕輕沖洗除去葡萄表面沙子和灰塵，在無(wú)菌操作臺(tái)中自然晾干。紅糖用紫外殺菌45min。葡萄與紅糖按質(zhì)量比1∶1加入到已滅菌的玻璃瓶中，封口，放在暗處，常溫下發(fā)酵56d。為了避免潛在的菌體污染，制備過(guò)程中所有操作都在無(wú)菌條件下進(jìn)行。在發(fā)酵過(guò)程中，每隔8d取樣，樣品經(jīng)蜀科高速離心機(jī) 10000r/min離心10min后，用于測(cè)定。
總酚含量測(cè)定
  100μL樣品加入到45.9mL去離子水，再加入1mLFolin-Ciocalteau試劑，反應(yīng)3min，后加入3mL20%的碳酸鈉溶液，25°C恒溫水浴振蕩2h，在760nm波長(zhǎng)處測(cè) 定吸光度，以去離子水為參比溶液?？偡雍恳詻](méi)食子酸等價(jià)物表示，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線線性方程y=0. 0917x+0.0208，R2=0.9996來(lái)測(cè)定總酚含量。其中：y為吸光度；x為樣品質(zhì)量濃度（GAE，μg/mL）
DPPH自由基清除能力
  40μL樣品加入到4mL0.1mmol/LDPPH-甲醇溶液中，再加入450μL50mmol/LTris-HClbuffer（7.4），25°C溫度下恒溫水浴30min。以去離子水為參比溶液。在517nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度（%）=[（A0-（A1-A2））/ A0]×100 （1）式中，A0———空白對(duì)照液的吸光度；A1———樣品測(cè)定管的吸光度；A2———樣品本底管的吸光度。
還原力測(cè)定
  30μL樣品加入到2.5mL 磷酸緩沖液（0.2mol/L，pH6.6），然后加入2.5mL 10g/L鐵qin化鉀，50°C反應(yīng)30min，再加入0.1g/ mL三氯乙酸2.5mL，在3000r/min下再次用蜀科高速離心機(jī)離心10min，立即取2.5mL上清液，加入2.5mL去離子水和0.5mL1g/L三氯化鐵。以去離子水為參比溶 液，在700nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。吸光度越高，還原力越強(qiáng)。
超氧自由基清除能力 
  50μL樣品加入到950μL磷酸緩沖液（0.1mol/LpH7.4），然后加入1mL120μmol/LPMS（用0.1mol/L的PBS，pH 7.4配制），1mL936μmol/LNADH（用0.1mol/L的PBS，pH7.4配制）和1mL300μmol/LNBT（用0.1mol/L的PBS，pH7.4配制）。在環(huán)境溫度下，反應(yīng)5min。以去離子水為參比溶液。在560nm波長(zhǎng) 處測(cè)定吸光度。 超氧自由基清除能力/%=[（A0-（A1-A2））/A0] ×100
羥基自由基清除能力
  135μL樣品加入 到1.4mL6mmol/LH2O2，然后加入0.6mL20 mmol/L水楊酸鈉和2mL1.5mmol/L硫酸亞鐵，37°C溫度下恒溫水浴1h。以去離子水為參比溶液。在562nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。 羥基自由基清除能力/%=[（A0-（A1-A2））/ A0]×100
ABTS自由基清除能力
  用7mmol/LABTS（用5mmol/L的PBS，pH7.4配制），加入過(guò) 硫酸鉀使終濃度為2.45mmol/L，在室溫條件下黑暗放置12~16h。使用前把ABTS自由基用PBS稀釋成在734nm波長(zhǎng)處吸光度為0.7±0.02。 取10μL樣品加入到5mL上述稀釋液中，在 30°C溫度下反應(yīng)5min。以去離子水為參比溶液。在734nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。 ABTS自由基清除能力/%=[（A0-（A1-A2））/ A0]×100
  經(jīng)實(shí)驗(yàn)研究表明，葡萄固有的多種有益菌天然發(fā)酵而產(chǎn)生的葡萄酵素產(chǎn)品具有良好的抗氧化性能?？寡趸阅茏兓?guī)律研究表明：發(fā)酵過(guò)程中總酚含量、還原力、DPPH自由基清除能力、羥基自由基清除能力和ABTS自由基清除能力總體呈逐漸增加趨勢(shì)，超氧自由基清除能力呈現(xiàn)先增加后略微降低再增加的趨勢(shì)。因此，平時(shí)可以適當(dāng)食用功能性微生物發(fā)酵產(chǎn)品，可以起到一定的抗衰老，抗菌，消炎，凈化血液，增強(qiáng)機(jī)體免疫能力等多種保健功能。
  此實(shí)驗(yàn)中，蜀科立式高速離心機(jī)發(fā)揮了強(qiáng)大作用，相關(guān)領(lǐng)域客戶如果對(duì)實(shí)驗(yàn)中的離心機(jī)感興趣可以隨時(shí)，給您更多詳細(xì)的解答哦！